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醋酸菌的分离纯化及初步鉴定 (二改)

• 2018 年 11 月 21 日 • 阅读: 187 • 实验

初版

详见:https://www.himiku.com/archives/48.html


以下为增加的部分培养基1

醋酸菌斜面培养基

葡萄糖 1克,酵母膏1克,碳酸钙1克,琼脂2.5克,水100毫升

斜面培养斜面制作

培养基按配方调配好(碳酸钙先不加入),分装试管,灭菌备用。碳酸钙按比例分装、灭菌。摆斜面前将培养基和碳酸钙混合,用手搓均匀,然后摆斜面,备用

醋酸菌培养基(Acetobacter Medium)

适用范围:恶臭醋酸杆菌混浊变种
葡萄糖100g ,酵母膏10g ,琼脂15g ,蒸馏水 1000ml ,pH 6.8

斜面培养基  

葡萄糖8g,酵母粉10g,碳酸钙5g,琼脂15~20g,水1000mL,pH5.5,分装试管。
0.IMPa灭菌20min。95%酒精(食用级)40mL。摆斜面

液体增殖培养基  

葡萄糖10g ,酵母粉10g,水1000mL,pH5.5
灭菌后加入酒精(食用级)40mL,0.1MPa灭菌20min

醋酸菌种的制备

扩大培养过程:安瓿管,液体试管1.液体试管2,100mL三角瓶,500mL三角瓶,1000mL三角瓶,种子罐

  1. 安瓿管开启:酒精棉球擦抹三次,用重器撞击,打开,注入0.5mL无菌水,将菌球溶解,全部注入装有10mL液体培养基的18×180试管1内,30℃培养72h,每2h摇动—次
  2. 菌体生长:培养基变混浊后,颜色变浅,对光观察摇动时有云雾状金属光泽。每只装有10mL液体培养基的试管2接入lmL或0.5mL菌液,30℃培养48h,每2h摇动—次。
  3. 三角瓶三级扩培,三角瓶中培养基的装量为50%,每级按种量在10%左右,在转换振荡器上恒温培养,培养温度均为30℃,时间依次缩短为36、36、24h,
  4. 种子罐培养基同前 配料后种子罐夹套加热灭菌100℃保持15min,冷却后,先加入4%食用酒精,无菌操作接入菌种。接种量为10%~12%,温度保持在30℃±1℃,通无菌空气,菌体生长时间为24~36h.视菌体生长情况及镜检结果而定
  5. 每次接种前,先将菌种进行外观观察 。有异样情况者,作涂片、染色、镜检观察,菌体生长不正常或染菌的三角瓶不得使用。外观正常者抽检2—3个样品,在确保菌株纯度、无污染的情况下转入下一级菌种扩培。
  6. 培养醋酸菌时,需要用含糖或酵母膏(维生素B)的培养基,在肉汤蛋白胨培养基上生长不良。大多数菌株可用六碳糖和甘油作为碳源,对甘露醇和葡萄糖酸盐很少能利用或不能利用,不分解乳糖、糊精和淀粉。醋酸菌不形成芽孢,一般为形态近于球菌的短杆菌。
  7. 醋酸菌可在PH4.3以下繁殖,增殖时多在液面成膜。幼龄细胞呈G-,老龄细胞呈可变性,因而染色只用来作为鉴定时的参考因素。
  8. 醋酸菌增殖时生成挥发性酸臭。感官判断类似于一种丁香成分,和纯醋酸的嗅感不同。防止方法不外呼改善工厂的环境卫生,加强卫生管理什么的。

但是它也是很好控制的:

  1. 好气性菌,尽可能降低密封容器的溶解氧(效果明显)
  2. 降低PH值基本无效
  3. 污染主要在5,6月份发生
  4. 与容器有关,塑料容器要比玻璃瓶容易感染,可能与塑料容器的透氧性有关
  5. 醋酸菌不形成芽孢,故耐热性不强,65℃5~10分钟即可杀死。所以综合来看醋酸菌不是很难控制的。
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已有 11 条评论
  1. 啊,怀念起我最痛恨的生物了@(酸爽)

  2. 假装能看懂∠( ᐛ 」∠)_

  3. 奥兹说钱 奥兹说钱

    哇,博主的收款码怎么做的

    1. @奥兹说钱搜索“动态二维码”就行,网上有教程

  4. 看成了酸酸乳(ssr)。。。

    1. @Lesun情有可原,下次看仔细了……

  5. 敲黑板@(挖鼻)引用格式不对,你的角标呢٩(ˊᗜˋ*)و

    1. @Gazzz引用?噢!改了改了

  6. 这篇文章的每个字我都认识,但把他们凑在一起,我就看不懂了@(狂汗)

  7. 。我是不是进错博客了@(笑尿)

    1. @AppleMiku哈哈哈,累趴时间到……